همکاری با انجمن علمی گیاهان دارویی ایران

نوع مقاله : مقاله پژوهشی

نویسندگان

1 دانشگاه گیلان

2 دانشگاه تخصصی فناوری های نوین آمل

10.22092/ijmapr.2024.363372.3364

چکیده

سابقه و هدف: ریشه نابجا در گیاهان دارویی منبع غنی از متابولیت‌های ثانویه باارزش هستند. سرخارگل (Echinacea purpurea (L.) Monech) یک گیاه دارویی مهم است و به‌طور گسترده در صنعت دارویی استفاده می‌شود. ریشه‌ها به‌طور سنتی در داروهای گیاهی و مکمل‌های غذایی به عنوان یک محرک سیستم ایمنی در درمان بیماری‌های التهابی، ویروسی و تنفسی استفاده می‌شوند. ناهمگنی سنتز ترکیبات مؤثره در محیط طبیعی، عملکرد پایین تولید گیاه در کنار عوامل دیگر ازجمله علل جست‌وجو برای رویکردهای جایگزین تولید مواد و اندام مؤثره گیاه هستند. در میان تکنیک‌های مختلف کشت‌های درون شیشه‌ای، کشت بافت‌های تمایز یافته همانند ریشه، معمولاً مقادیر بالاتری از متابولیت‌ها را نسبت به بافت‌های تمایز نیافته مانند کالوس و سلول‌های کشت مایع سلولی تولید می‌کنند.
مواد و روش‌ها: در این مطالعه، هدف اولیه انتخاب بهترین ریزنمونه گیاهی و شناسایی دقیق مؤثرترین ترکیب از تنظیم‌کننده‌های رشد گیاهی بود که بتواند استقرار موفقیت‌آمیز کشت‌ مایع ریشه نابجا را تسهیل کند. این بررسی شامل ارزیابی سه ریزنمونه گیاهی متمایز برگ، دمبرگ و ریشه بود. این ریزنمونه‌ها تحت تأثیر غلظت‌های مختلف 0، 0.5، 1، 1.5 و 2 میلی‌گرم در لیتر از دو نوع تنظیم‌کننده رشد گیاهی ایندول-3 - بوتیریک اسید (IBA) و 1- نفتالن استیک اسید (NAA) قرار گرفتند. تعداد ریشه‌های نابجا در ریزنمونه‌ها در غلظت‌های مختلف از تنظیم‌کننده‌های رشد گیاهی پس از شش هفته اندازه‌گیری شد. در آزمایش مجزای دیگری، اثر غلظت‌های مختلف ساکارز شامل 10، 20، 30، 40، 50 و 60 گرم در لیتر محیط کشت بر روی ویژگی‌های دینامیکی رشد (وزن تر و خشک، حجم محیط باقیمانده، هدایت الکتریکی (EC) و pH) و فیتوشیمیایی (فنول کل، فلاونوئید کل و فعالیت آنتی‌اکسیدانی) ریشه در طول چهار هفته کشت، بررسی شد. برای اعمال تیمارهای ساکارز، مقدار 0.35 گرم وزن تر از ریشه‌های نابجا در داخل ارلن مایرهای 250 میلی‌لیتری حاوی 50 میلی‌لیتر نصف محیط کشت MS، یک میلی‌گرم در لیتر IBA به همراه غلظت‌های مختلف ساکارز با pH= 5.8 قرار داده شدند. محتوای سه فلاسک هر تیمار در هر هفته برای اندازه‌گیری استفاده شد. مطالعات در قالب آزمایش فاکتوریل به صورت طرح پایه کاملاً تصادفی انجام شدند و مورد تجزیه‌وتحلیل آماری با استفاده از نرم‌افزار SPSS قرار گرفتند.
نتایج: ریشه‌های نابجا در ریزنمونه‌های برگ بسیار مؤثرتر از ریزنمونه‌های ریشه و دمبرگ بودند. میانگین تعداد ریشه‌های نابجا در ریزنمونه برگ 93.5% بود، در حالی که ریزنمونه‌های دمبرگ و ریشه به ترتیب 6.5 و صفر درصد ریشه نابجا تولید کردند. محیط MS  حاوی یک میلی‌گرم در لیتر IBA حداکثر تعداد ریشه را با میانگین 33.3% ایجاد کرد، در حالی ‌که غلظت‌های صفر و دو میلی‌گرم در لیتر از هر دو هورمون استفاده شده ریشه‌ای تولید نکردند. بیشترین وزن تر با میزان 29.8 گرم در لیتر در هفته چهارم کشت مشاهده شد که این میزان 4.3 برابر وزن تلقیح اولیه بود. با پیشرفت مدت زمان کشت، میزان EC و pH محیط کشت کاهش یافت. البته افزایش زمان کشت، تأثیر قابل‌توجهی بر تولید فلاونوئید کل و فعالیت آنتی‌اکسیدانی مرتبط در ریشه‌های نابجا نداشته است. با وجود این، فنول کل با میزان 56.6 میلی‌گرم گالیک اسید در هر گرم وزن خشک در هفته چهارم تحت تأثیر افزایش معنی‌دار مدت زمان کشت قرار گرفت. به‌طورکلی، نتایج نشان داد که غلظت‌های کمتر ساکارز برای تولید زیست‌توده و محتوای ترکیبات مؤثره و فعالیت آنتی‌اکسیدانی کارآمدتر هستند. بالاترین تجمع زیست‌توده و محتوای فنول کل، بیشترین مقدار از محتوای فلاونوئید کل و بالاترین درصد مهار رادیکال آزاد به ترتیب با به‌کارگیری غلظت‌های سه، دو و 1% ساکارز در هفته چهارم کشت اندازه‌گیری گردید. در کل، همبستگی معکوسی بین میزان EC محیط کشت باقیمانده و زیست‌توده ریشه‌ها در غلظت‌های پایین‌تر ساکارز با افزایش مدت زمان کشت مشاهده شد.
نتیجه‌گیری: از آنجایی که کشت مایع ریشه نابجا E. purpurea به عنوان یک منبع جایگزین بالقوه برای تولید متابولیت‌های ثانویه به‌ویژه مشتقات کافئیک اسید (Caffeic acid) شناسایی می‌شوند، یافته‌های این پژوهش ممکن است به مطالعات تولید انبوه اندام مؤثره ریشه و به دنبال آن، این ترکیب‌های خیلی با ارزش با استفاده از سیستم‌های بیوراکتور مناسب آزمایشگاهی کمک کند. 

کلیدواژه‌ها

موضوعات

- Ahmad, N., Rab, A., Sajid, M., Ahmad, N., Fazal, H., Ali, M. and Egertsdotter, U., 2021. Sucrose-dependent production of biomass and low-caloric steviol glycosides in adventitious root cultures of Stevia rebaudiana (Bert.). Industrial Crops and Products, 164: 113382.
- Ali, M. and Abbasi, B.H., 2013. Production of commercially important secondary metabolites and antioxidant activity in cell suspension cultures of Artemisia absinthium L. Industrial Crops and Products, 49: 400-406.
- Andi, S.A., Gholami, M. and Ford, C.M., 2018. The effect of methyl jasmonate and light irradiation treatments on the stilbenoid biosynthetic pathway in Vitis vinifera cell suspension cultures. Natural product research, 32(8): 909-917.
- Andi, S.A., Gholami, M., Ford, C.M. and Maskani, F., 2019. The effect of light, phenylalanine and methyl jasmonate, alone or in combination, on growth and secondary metabolism in cell suspension cultures of Vitis vinifera. Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology, 199: 111625.
- Asadi-Sanam, S., Zavareh, M., Pirdashti, H., Sefidcan, F. and Nematzadeh, G., 2016. Effect of planting date and density on dry matter and antioxidant capacity of purple coneflower [Echinacea purpurea (L.) Moench] root. Journal of Plant Process and Function, 5(15): 57-74.
- Baque, M.A., Hahn, E.J. and Paek, K.Y., 2010. Growth, secondary metabolite production and antioxidant enzyme response of Morinda citrifolia adventitious root as affected by auxin and cytokinin. Plant Biotechnology Reports, 4: 109-116.
- Baque, M.A., Elgirban, A., Lee, E.J. and Paek, K.Y., 2012. Sucrose regulated enhanced induction of anthraquinone, phenolics, flavonoids biosynthesis and activities of antioxidant enzymes in adventitious root suspension cultures of Morinda citrifolia L. Acta Physiologiae Plantarum, 34: 405-415.
- Baque, A., Murthy, H.N. and Paek, K.Y., 2014. Adventitious root culture of Morinda citrifolia in bioreactors for production of bioactive compounds. Production of biomass and bioactive compounds using bioreactor technology, 185-222.
- Bauer, R., 1999. Chemistry, analysis and immunological investigations of Echinacea phytopharmaceuticals: 41-88. In: Wagner, H. (Ed.) Immunomodulatory Agents from Plants. Progress in Inflammation Research, Birkhäuser, Basel, 372p.
- Cui, H.Y., Abdullahil Baque, M., Lee, E.J. and Paek, K.Y., 2013. Scale-up of adventitious root cultures of Echinacea angustifolia in a pilot-scale bioreactor for the production of biomass and caffeic acid derivatives. Plant biotechnology reports, 7: 297-308.
- Cui, X.H., Chakrabarty, D., Lee, E.J. and Paek, K.Y., 2010a. Production of adventitious roots and secondary metabolites by Hypericum perforatum L. in a bioreactor. Bioresource technology, 101(12): 4708-4716.
- Cui, X.H., Murthy, H.N., Wu, C.H. and Paek, K.Y., 2010b. Sucrose-induced osmotic stress affects biomass, metabolite, and antioxidant levels in root suspension cultures of Hypericum perforatum L. Plant Cell, Tissue and Organ Culture (PCTOC), 103: 7-14.
- De-Eknamkul, W. and Ellis, B.E., 1985. Effects of macronutrients on growth and rosmarinic acid formation in cell suspension cultures of Anchusa officinalis. Plant Cell Reports, 4: 46-49.
- Deepthi, S. and Satheeshkumar, K., 2017. Effects of major nutrients, growth regulators and inoculum size on enhanced growth and camptothecin production in adventitious root cultures of Ophiorrhiza mungos L. Biochemical Engineering Journal, 117: 198-209.
- Devi, J., Kumar, R., Singh, K., Gehlot, A., Bhushan, S. and Kumar, S., 2021. In vitro adventitious roots: a non-disruptive technology for the production of phytoconstituents on the industrial scale. Critical Reviews in Biotechnology, 41(4): 564-579.
- Dohare, B., Jain, K., jain, B. and Khare, S., 2012. Rapid clonal propagation of an endangered medicinal plant Plumbago zeylanica Linn. International Journal of Pharmacy & Life Sciences, 3(8): 1883-1887
- Etminan Rafsanjani, A. and Moeini, A., 2014. Exploring the effect of auxin hormone on the induction of adventitious root formation in Echinacea purpurea medicinal plant. 1st International and 13th Iranian Crop Science Congress and 3rd Iranian Seed Science and Technology Conference. Karaj, Iran, 24-26 August, 1-3.
- Fazal, H., Abbasi, B.H., Ahmad, N., Ali, M. and Ali, S., 2016. Sucrose induced osmotic stress and photoperiod regimes enhanced the biomass and production of antioxidant secondary metabolites in shake-flask suspension cultures of Prunella vulgaris L. Plant Cell, Tissue and Organ Culture (PCTOC), 124: 573-581.
- Fazal, H., Abbasi, B.H. and Ahmad, N., 2014. Optimization of adventitious root culture for production of biomass and secondary metabolites in Prunella vulgaris L. Applied biochemistry and biotechnology, 174: 2086-2095.
- Fu, R., Zhang, P., Jin, G., Wang, L., Qi, S., Cao, Y., Martin, C. and Zhang, Y., 2021. Versatility in acyltransferase activity completes chicoric acid biosynthesis in purple coneflower. Nature Communications, 12(1): 1563.
- Gaid, M., Haas, P., Beuerle, T., Scholl, S. and Beerhues, L., 2016. Hyperforin production in Hypericum perforatum root cultures. Journal of Biotechnology, 222: 47-55.
- Gao, X., Zhu, C., Jia, W., Gao, W., Qiu, M., Zhang, Y. and Xiao, P., 2005. Induction and characterization of adventitious roots directly from the explants of Panax notoginseng. Biotechnology letters, 27: 1771-1775.
- Gao, Y., Wu, C.H., Piao, X.C., Han, L., Gao, R. and Lian, M.L., 2018. Optimization of culture medium components and culture period for production of adventitious roots of Echinacea pallida Nutt. Plant Cell, Tissue and Organ Culture (PCTOC), 135: 299-307.
- Gaosheng, H. and Jingming, J., 2012. Production of useful secondary metabolites through regulation of biosynthetic pathway in cell and tissue suspension culture of medicinal plants. Recent advances in plant in vitro culture: 197-210.
- Gómez-Aguirre, Y.A., Zamilpa, A., González-Cortazar, M. and Trejo-Tapia, G., 2012. Adventitious root cultures of Castilleja tenuiflora Benth. as a source of phenylethanoid glycosides. Industrial Crops and Products, 36: 188-195.
- Gould, A.R., Everett, N.P., Wang, T.L. and Street, H.E., 1981. Studies on the control of the cell cycle in cultured plant cells: I. Effects of nutrient limitation and nutrient starvation. Protoplasma, 106: 1-13.
- Hahlbrock, K. and Kuhlen, E., 1972. Relationship between growth of parsley and soybean cells in suspension cultures and changes in the conductivity of the culture medium. Planta, 108: 271-278.
- Hahn, E.J., Wu, C.H. and Paek, K.Y., 2008. Production of root biomass and secondary metabolites through adventitious root cultures of Echinacea purpurea in bioreactors. Proceeding of VI International Symposium on In Vitro Culture and Horticultural Breeding, 829: 73-78.
- Hamrouni-Sellami, I., Rahali, F.Z., Rebey, I.B., Bourgou, S., Limam, F. and Marzouk, B., 2013. Total phenolics, flavonoids, and antioxidant activity of sage (Salvia officinalis L.) plants as affected by different drying methods. Food and Bioprocess Technology, 6(3): 806-817.
- Jaisi, A., Sakunphueak, A. and Panichayupakaranant, P., 2013. Increased production of plumbagin in Plumbago indica root cultures by gamma ray irradiation. Pharmaceutical Biology, 51(8): 1047-1051.
- Jeong, J.A., Wu, C.H., Murthy, H.N., Hahn, E.J. and Paek, K.Y., 2009. Application of an airlift bioreactor system for the production of adventitious root biomass and caffeic acid derivatives of Echinacea purpurea. Biotechnology and Bioprocess Engineering, 14: 91-98.
- Jiang, Y.J., Piao, X.C., Liu, J.S., Jiang, J., Lian, Z.X., Kim, M.J. and Lian, M.L., 2015. Bioactive compound production by adventitious root culture of Oplopanax elatus in balloon-type airlift bioreactor systems and bioactivity property. Plant Cell, Tissue and Organ Culture (PCTOC), 123: 413-425.
- Karataş, İ., 2023. Optimization of sucrose concentration to promote root proliferation and secondary metabolite accumulation in adventitious root cultures of Ocimum basilicum. In Vitro Cellular & Developmental Biology-Plant: 59(3): 365-377.
- Kim, Y.S., Hahn, E.J., Yeung, E.C. and Paek, K.Y., 2003. Lateral root development and saponin accumulation as affected by IBA or NAA in adventitious root cultures of Panax ginseng CA Meyer. In Vitro Cellular & Developmental Biology-Plant, 39: 245-249.
- Kim, Y.E., 2017. Biosynthesis of isoflanovones and coumestrol from adventitious root and callus in Glycine max. Master thesis, Chungbuk National Universiry, Cheongju, Republic of Korea.
- Krishnan, S.S. and Siril, E.A., 2018. Elicitor mediated adventitious root culture for the large-scale production of anthraquinones from Oldenlandia umbellata L. Industrial Crops and Products, 114: 173-179.
- Li, H., Piao, X.C., Gao, R., Jin, M., Jiang, J. and Lian, M.L., 2016. Effect of several physicochemical factors on callus biomass and bioactive compound accumulation of Reynoutria sachalinensis bioreactor culture. In Vitro Cellular & Developmental Biology-Plant, 52: 241-250.
- Liu, H., Wang, J., Gao, W., Wang, Q., Zhang, L. and Man, S., 2014. Optimization and quality assessment of adventitious roots culture in Panax quinquefolium L. Acta Physiologiae Plantarum, 36: 713-719.
- Min, J.Y., Jung, H.Y., Kang, S.M., Kim, Y.D., Kang, Y.M., Park, D.J., Prasad, D.T. and Choi, M.S., 2007. Production of tropane alkaloids by small-scale bubble column bioreactor cultures of Scopolia parviflora adventitious roots. Bioresource technology, 98(9): 1748-1753.
- Murthy, H.N., Lee, E.J. and Paek, K.Y., 2014. Production of secondary metabolites from cell and organ cultures: strategies and approaches for biomass improvement and metabolite accumulation. Plant Cell, Tissue and Organ Culture (PCTOC), 118: 1-16.
- Praveen, N. and Murthy, H.N., 2014. Production of withanolides from cell and organ cultures of Withania somnifera L. Dunal: 285-315. In: Paek, K.Y., Murthy, H.N., Zhong, J.J. (Eds.), Production of Biomass and Bioactive Compounds Using Bioreactor Technology. Springer, Dordrecht, 709p.
- Rajesh, M., Sivanandhan, G., Arun, M., Vasudevan, V., Theboral, J., Girija, S., Manickavasagam, M., Selvaraj, N. and Ganapathi, A., 2014. Factors influencing podophyllotoxin production in adventitious root culture of Podophyllum hexandrum Royle. Acta physiologiae plantarum, 36: 1009-1021.
- Ramachandra Rao, S.R. and Ravishankar, G.A., 2002. Plant cell cultures: chemical factories of secondary metabolites. Biotechnology advances, 20(2): 101-153.
- Shohael, A.M., Chakrabarty, D., Ali, M.B., Yu, K.W., Hahn, E.J. and Paek, K.Y., 2006. Enhancement of Eleutherosides production in embryogenic cultures of Eleutherococcus sessiliflorus in response to sucrose induced osmotic stress. Process Biochemistry, 41: 512-518.
- Sivakumar, G., 2006. Bioreactor technology: a novel industrial tool for high‐tech production of bioactive molecules and biopharmaceuticals from plant roots. Biotechnology Journal: Healthcare Nutrition Technology, 1(12): 1419-1427.
- Sivanandhan, G., Rajesh, M., Arun, M., Jeyaraj, M., Dev, G.K., Manickavasagam, M., Selvaraj, N. and Ganapathi A., 2012. Optimization of carbon source for hairy root growth and withaferin A and withanone production in Withania somnifera. Natural Product Communications, 7(10): 1271-1272.
- Tam, H.T., Nam, N.B., Chien, H.X., Cuong, L.K., Tai, N.T., Cuong, N.V., Huy, N.P., Huong, T.T., Hieu, T., Linh, N.T.N. and Nhut, D.T., 2015. Optimization of culture conditions and medium composition for adventitious root induction from leaves of Panax vietnamensis Ha et Grushv. Vietnam Journal of Biotechnology, 13: 865-873.
- Tepe, B. and Sökmen, A., 2007. Production and optimisation of rosmarinic acid by Satureja hortensis L. callus cultures. Natural Product Research, 21(13): 1133-1144.
- Trinh, T.H., Tam, H.T., Ngan, H.T.M., Tai, N.T., Huy, N.P., Chien, H.X., Nam, N.B., Luan, V.Q., Hien, V.T., Huong, N.T.T., Ngoc, P.B., Ha, C.H. and Nhut, D.T., 2012. Influence of explant source, explant size and auxinon in vitro adventitious shoot regeneration ability of Ngoc Linh ginseng Panax vietnamensis. Vietnam Journal of Biotechnology, 10: 877-886.
- Verpoorte, R., Contin, A. and Memelink, J., 2002. Biotechnology for the production of plant secondary metabolites. Phytochemistry reviews, 1: 13-25.
- Waidyanatha, S., Pierfelice, J., Cristy, T., Mutlu, E., Burback, B., Rider, C.V. and Ryan, K., 2020. A strategy for test article selection and phytochemical characterization of Echinacea purpurea extract for safety testing. Food and Chemical Toxicology, 137: 111125.
- Wang, H.Q., Li, H., Wu, C.H., Piao, X.C. and Lian, M.L., 2017. Effect of several factors on adventitious root biomass and bioactive compound accumulation of Echinacea pallida. Agricultural Sciences, 45: 125-128.
- Wu, C.H., Dewir, Y.H., Hahn, E.J. and Paek, K.Y., 2006. Optimization of culturing conditions for the production of biomass and phenolics from adventitious roots of Echinacea angustifolia. Journal of Plant Biology, 49: 193-199.
- Wu, S.Q., Lian, M.L., Gao, R., Park, S.Y. and Piao, X.C., 2011. Bioreactor application on adventitious
root culture of Astragalus membranaceus. In Vitro Cellular & Developmental Biology-Plant, 47: 719-724.
- Xu, W., Cheng, Y., Guo, Y., Yao, W. and Qian, H., 2022. Effects of geographical location and environmental factors on metabolite content and immune activity of Echinacea purpurea in China based on metabolomics analysis. Industrial Crops and Products, 189: 115782.
- Xu, W., Zhu, H., Hu, B., Cheng, Y., Guo, Y., Yao, W. and Qian, H., 2021. Echinacea in hepatopathy: A review of its phytochemistry, pharmacology, and safety. Phytomedicine, 87: 153572.
- Yin, S., Gao, W., Wang, J., Zhang, J., Man, S., Jing, S.S. and Liu, H., 2013. Effects of dynamic changes of nutrients on adventitious roots growth and periplocin accumulation in culture of Periploca sepium Bunge. Acta physiologiae plantarum, 35: 3085-3090.
- Yu, K.W., Hahn, E.J. and Paek, K.Y., 2000. Production of adventitious ginseng roots using bioreactors. Korean Journal of Plant Tissue Culture (KJPTC), 27: 309-315.
- Zhang, Y.H., Zhong, J.J. and Yu, J.T., 1996. Enhancement of ginseng saponin production in suspension cultures of Panax notoginseng: Manipulation of medium sucrose. Journal of Biotechnology, 51: 49-56.
- Zhang, Y., Liu, K. and Li, W.U., 2001. Advances in studies on Echinacea Moench. Chinese Traditional and Herbal Drugs, 32: 852-855.